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厭氧培養(yǎng)別再“踩雷”!一文讀懂主流厭氧菌培養(yǎng)技術,科研小白也能進階

更新時間:2025-11-14      點擊次數(shù):159


    最近在某書上,總刷到實驗員們關于厭氧菌培養(yǎng)的“血淚帖":要么是培養(yǎng)罐漏氣了,一周的實驗白費;要么是手套箱成本太高,被老板念叨;養(yǎng)的菌狀態(tài)時好時壞,數(shù)據(jù)總不穩(wěn)定……

    別急!這篇超詳細的厭氧培養(yǎng)技術大盤點,就是來為你排憂解難的。我們將拋開廠商濾鏡,公正剖析從經(jīng)典到前沿的幾種主流方法,幫你搞清楚它們的優(yōu)缺點,找到適合你課題的那一條“捷徑"。



(1)傳統(tǒng)培養(yǎng)技術大盤點


厭氧菌的培養(yǎng)方法有許多:

  • 物理方法包括遮斷空氣法、煮沸法、真空法、空氣置換法、氣體噴射法或轉(zhuǎn)管法等;

  • 化學方法包括焦性沒食子酸法、鐵絲絨法、保險粉法等;

  • 生物學方法包括與需氧菌共生好氧法等;

  • 混合法包括厭氧罐(袋)法、厭氧手套箱法或厭氧室法、空氣置換鐵絲絨法、空氣置換鈀粒法等。

以下,我們將對幾個常用方法展開詳細介紹。


一、Gas-pak法

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   Gas-pak法的核心原理是通過化學反應消耗密閉容器中的氧氣,并生成二氧化碳,從而營造適合厭氧菌生長的無氧環(huán)境,是“專用厭氧罐 + 配套產(chǎn)氣袋 + 內(nèi)置催化劑"的標準化成套方案 。

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優(yōu)點:

1. 操作相對簡便,無需復雜設備,將準備好的材料放入?yún)捬豕藜纯桑?/span>

2. 適合中小規(guī)模實驗需求


缺點:

1. Gas-pak法的氣體發(fā)生袋是一次性的,使用后就需要更換,長期使用下來成本較高

2. 觸媒在使用一定次數(shù)后催化效果會下降,也需要定期更換;

3. 在操作過程中若有疏忽(比如氣體發(fā)生袋剪開后未及時放入?yún)捬豕蕖⒓铀鬀]有迅速緊閉罐蓋等,都可能導致厭氧環(huán)境營造失敗。


二、焦沒食子酸法

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   焦沒食子酸法利用的是化學反應來營造厭氧環(huán)境。它與堿反應時,會消耗氧氣,從而在相對密閉的空間內(nèi)形成厭氧環(huán)境。

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優(yōu)點:成本較低,操作也相對簡單,不需要復雜的設備,在早期的厭氧菌培養(yǎng)研究中應用較為廣泛


缺點:

1. 反應過程中可能會產(chǎn)生的NO等雜質(zhì),不利于一些細菌生長;

2. 在吸收氧氣的同時,它也會吸收二氧化碳,而二氧化碳對于某些厭氧菌的生長是必需的,這就可能導致某些厭氧菌無法良好生長;

3. 對反應的溫度、濕度等實驗條件的控制要求較高,若條件控制不當,會影響除氧效果;

4. 指示劑不夠靈敏,難以準確判斷厭氧環(huán)境是否達到要求。


三、厭氧產(chǎn)氣袋法

(三菱瓦斯化學株式會社AnaeroPack系列)

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   厭氧產(chǎn)氣袋法的原理是將產(chǎn)氣袋與平板一同放入密封空間,產(chǎn)氣袋中的化學成分遇水反應生成氫氣和二氧化碳,鈀催化劑促使氫氣與殘余氧氣結合生成水,將罐內(nèi)氧濃度降至1%以下,營造無氧環(huán)境供厭氧菌生長。

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優(yōu)點:

1. 操作簡便,無需復雜設備,僅需“產(chǎn)氣袋 + 靈活密封空間" 的簡易搭配

2. 快速除氧:通常30-60分鐘內(nèi)氧氣就能被吸收,有利于厭氧菌快速進入生長狀態(tài)。

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缺點:

1. 產(chǎn)氣袋屬于一次性消耗品,單次使用成本較高,對于大規(guī)模的厭氧培養(yǎng)需求,用量較大,成本會顯著增加

2. 密封要求高,厭氧罐蓋若未擰緊或密封圈老化,易漏氧導致培養(yǎng)失敗

3. 無法實時調(diào)節(jié)氣體成分,若厭氧菌對二氧化碳濃度有特殊要求,難以精準適配


四、厭氧手套箱法

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   厭氧手套箱法是通過向密封箱體內(nèi)充入混合氣體,并利用鈀催化劑持續(xù)催化氫氣與氧氣反應生成水,從而主動、持續(xù)地維持箱內(nèi)穩(wěn)定的無氧環(huán)境。主要通過以下三個部分協(xié)同工作


1.循環(huán)除氧系統(tǒng)(核心)

   系統(tǒng)向箱內(nèi)通入混合氣體(含N?、H?、CO?按比例組成)。H?與箱內(nèi)氣體中殘留的O?,在鈀催化劑的表面反應生成H2O,從而消耗掉氧氣。

   這個循環(huán)除氧的過程會持續(xù)進行確保任何通過傳遞艙或手套操作縫隙微量滲入的氧氣被立刻清除


2.氣體置換艙(傳遞艙)

   這是物品進出箱體的“氣鎖"。它是一個帶有內(nèi)外兩道門的密封小艙室。

放入物品流程:

1. 打開外門,放入物品,關閉外門。

2. 啟動“置換"程序,艙內(nèi)會進行多次抽真空→充入混合氣體的循環(huán),以排除艙內(nèi)所有的空氣(氧氣)。

3. 當艙內(nèi)氣體與箱體內(nèi)氣體一致后,才能打開內(nèi)門,將物品移入主工作箱體。


3.密封箱體與手套接口

   人員通過箱體上固定的密封手套進行操作,在隔絕外界空氣的前提下,處理箱內(nèi)的樣品和實驗。

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優(yōu)點:

1. 能提供非常穩(wěn)定的厭氧條件,氧氣濃度可降到極低水平;

2. 可在箱內(nèi)進行多種實驗操作,兼顧固液培養(yǎng)形式,適合大規(guī)模培養(yǎng)厭氧菌的研究

3. 無需頻繁打開箱門,有效避免外界空氣的干擾和污染;

4. 部分手套箱內(nèi)置培養(yǎng)箱/溫控系統(tǒng),可進行精確溫度控制,方便進行長時間培養(yǎng)和實時觀察。


缺點:

1.設備價格昂貴,維護和保養(yǎng)也需較高的費用;

2. 設備長期運行,氣體消耗量大,運行成本高

3. 占用空間大,需要專門的場地放置

4. 操作步驟復雜,需要隨時隨地觀察設備運行情況,否則易出現(xiàn)操作失誤,影響實驗結果。


五、抽氣換氣厭氧培養(yǎng)法

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   抽氣換氣厭氧培養(yǎng)法是通過人工操作真空泵抽取密閉容器內(nèi)空氣,再手動注入氮氣、二氧化碳等無氧混合氣體,重復2-3次抽換流程排盡氧氣,最終形成厭氧環(huán)境。

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優(yōu)點:

1. 氣體置換效率高,能快速將氧濃度降至較低水平;

2. 可調(diào)控氣體成分比例,適配不同厭氧菌需求;

3. 無化學試劑反應產(chǎn)物,避免對菌株生長產(chǎn)生額外抑制


缺點:

1. 需單獨配備真空泵、高壓氣體鋼瓶、減壓閥等成套設備,初期投入成本高,占用實驗空間

2. 全程依賴人工操作,抽氣/注氣的壓力、時間全憑經(jīng)驗把控,氣體比例精準度差,易因操作差異導致培養(yǎng)結果波動;

3. 缺乏實時監(jiān)控功能,無法直觀判斷罐內(nèi)氧濃度、氣體比例是否達標,需額外通過生物指示劑驗證,耗時且繁瑣。



   傳統(tǒng)厭氧菌培養(yǎng)中普遍存在的“操作繁瑣“、"氣體消耗大“、“環(huán)境難控"等核心痛點,正是華端生物HD-AN系列智能厭氧/微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)旨在破解的關鍵。該系統(tǒng)以傳統(tǒng)抽氣換氣法的氣體抽排置換原理換為基礎,優(yōu)化了操作流程與控制精度,能夠針對性解決這些長期困擾實驗室的難題。




(2)華端生物HD-AN系列智能厭氧/微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)的“超能力"


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HD-AN系列 智能厭氧/微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)


一、操作簡單,一鍵厭氧

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   HD-AN系列智能厭氧微需氧系統(tǒng)搭載高精度傳感器與自動控氧系統(tǒng),可根據(jù)不同菌種需求,預設厭氧、微需氧、彎曲菌等多種核心培養(yǎng)模式


  1. 一鍵生成,無需人工干預;

  2. 快速生成培養(yǎng)環(huán)境,大幅縮短等待時間:

  • 最快達到微需氧條件<70秒

  • 最快達到厭氧環(huán)境<150秒

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二、成本低廉,多重適配

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1. 設備隨開隨用,無其他耗材;

2. 氣體消耗量極低:

  • 達到厭氧環(huán)境氣體消耗≤7L/12平皿

  • 達到微需氧環(huán)境氣體消耗≤2L/12平皿

3. 有豐富的培養(yǎng)罐選擇,實現(xiàn)對各類培養(yǎng)載體的全面適配——提供8種培養(yǎng)罐可選

  • 適合放置 6 個、12 個、24 個、36 個、60個常規(guī)培養(yǎng)皿的型號

  • 彎曲菌專用雙孔培養(yǎng)皿的適配罐

  • 可放置酶標板、96 孔板等微生物鑒定專用載體的培養(yǎng)罐

  • 可放置 10 只培養(yǎng)袋的志賀氏菌專用培養(yǎng)罐

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4. 配備注射針模式,是針對小型密封容器(如試管、西林瓶、增菌管等)設計的專屬厭氧環(huán)境生成功能,專門解決傳統(tǒng)方法處理小容量樣本時 “密封難、除氧差、操作繁"的痛點


三、實時監(jiān)控,過程保障

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   系統(tǒng)配置無線氧濃度實時監(jiān)測系統(tǒng),用于厭氧和微氧微生物、細胞等培養(yǎng)時的氧濃度、二氧化碳濃度、溫度、濕度等的實時監(jiān)測,確保培養(yǎng)環(huán)境符合實驗要求。

   超出濃度范圍機器自動報警提醒,幫助實驗人員及時察覺設備狀態(tài)變化,避免因操作失誤或故障未及時處理導致的培養(yǎng)風險,使整個培養(yǎng)過程全程得到保障。

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HD-AO系列 無線氧濃度實時監(jiān)測系統(tǒng)




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